基于免疫磁分离-双重荧光定量PCR的鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的检测

基于免疫磁分离-双重荧光定量PCR的鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的检测
目的  使用免疫磁分离-双重荧光定量PCR方法实现对鲜猪肉中金黄色葡萄球菌和志贺氏菌的同时、快速检测。方法  在37 ℃的条件下, 利用特异性免疫磁球从250 mL循环体系中快速、有效地捕获目标菌。再通过特异性的引物与探针, 对沙门氏菌和志贺氏菌进行双重荧光定量PCR检测。结果  本研究方法针对鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的检测限分别达到3.4 cfu/g和9.4 cfu/g。方法总体灵敏度、特异性和准确度均达到100%。此外, 通过对30组实际样品的检测, 该方法与传统标准方法的结果保持一致。结论  本研究建立的免疫磁分离-双重荧光定量PCR方法比国标方法更快速和高效, 适用于鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的快速检测。

Objective  To develop a rapid and simultaneous detection for Salmonella spp. and Shigella spp. from fresh pork samples by combining immunomagnetic separation (IMS) with duplex real-time PCR (RT-PCR). Methods  Magnetic beads coated with speci?c antibodies were used to capture the pathogens from a 250 mL  cycling system at 37 ℃ condition. Then, duplex RT-PCR was applied to detect Salmonella spp. and Shigella spp. with 2 sets of specific primers and probes. Results  The limit of detections were 3.4 cfu/g for Salmonella spp., and 9.4 cfu/g for Shigella spp.. The sensitivity, specificity, and accuracy of IMS-multiplex RT-PCR method were all 100%. Moreover, the results of new method were consistent to those of traditional method by detecting 30 samples. Conclusion  IMS-duplex RT-PCR method is more rapid and effective than GB method, and which is suitable for the rapid detection of Salmonella spp. and Shigella spp. in fresh pork.

标题：基于免疫磁分离-双重荧光定量PCR的鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的检测
英文标题：Detection of Salmonella spp. and Shigella spp. in fresh pork using duplex real-time PCR based on immunemagnetic separation

作者：
马凯 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
高丽娟 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
武会娟 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
杜美红 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
白羽 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
陈尔凝 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
刘杰 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心
刘悦 北京市理化分析测试中心,北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心,北京市食品安全分析测试工程技术研究中心

中文关键词:沙门氏菌,志贺氏菌,免疫磁分离,双重荧光定量PCR,
英文关键词:Salmonella spp.,Shigella spp.,immunomagnetic separation,duplex real-time PCR,

发表日期：2015-07-28

2025-1-29 20:00 上传 基于免疫磁分离-双重荧光定量PCR的鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的检测.pdf

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