文档名：狂犬病病毒核衣壳蛋白的原核表达与鉴定
摘要：为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RVN基因序列(登录号为1489853),在不改变RVN蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a(+)/RVN,将该质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达,利用His-tag镍柱进行重组RVN蛋白的纯化,对纯化后的RVN蛋白进行SDS-PAGE鉴定及Westernblot分析.结果表明:重组质粒双酶切后在1359bp处有目的条带,经测序后与其所对应的已知基因序列完全相符,当重组菌在IPTG浓度0.1mmol/L、30℃诱导6h,RVN蛋白表达量最高;经过镍柱纯化获得了RVN重组蛋白;BCA法测得重组RVN蛋白浓度达1.783mg/mL;在51KD处可见明显的蛋白印迹,与预期目的条带相符;使用该方法成功在大肠杆菌系统高效表达了RVN蛋白,为后续狂犬病的检测与新型疫苗的研制奠定了基础.
作者：谷志鹏 向梦玲 凌洪权 骆璐 吴胜昔 董春霞 冉皑 郭宇 Author：GUZhipeng XIANGMengling LINGHongquan LUOLu WUShengxi DONGChunxia RANAi GUOYu
作者单位：重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054重庆市动物疫病预防控制中心,重庆401120
刊名：重庆理工大学学报 ISTIC
Journal：JournalofChongqingInstituteofTechnology
年，卷(期)：2023, 37(4)
分类号：R373.9
关键词：狂犬病病毒 N蛋白 原核表达 镍柱纯化 蛋白免疫印迹
机标分类号：S858.92R378.21Q786
在线出版日期：2023年3月20日
基金项目：重庆市技术创新与应用示范专项:重庆市巴南区科技计划项目，重庆理工大学研究生创新基金项目，大学生创新创业训练计划项目，大学生创新创业训练计划项目，大学生创新创业训练计划项目，重庆市生猪产业技术体系项目狂犬病病毒核衣壳蛋白的原核表达与鉴定[
期刊论文] 重庆理工大学学报--2023, 37(4)谷志鹏 向梦玲 凌洪权 骆璐 吴胜昔 董春霞 冉皑 郭宇为实现狂犬病病毒核衣壳蛋白在原核系统中高效表达,参考GenBank中发布的RVN基因序列(登录号为1489853),在不改变RVN蛋白氨基酸序列的情况下,对该基因的密码子进行优化,化学合成N基因,并将其克隆至原核表达载体pET28a(...参考文献和引证文献
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引证文献
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