磁固定α葡萄糖苷酶在中药酶抑制剂筛选中的应用

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为了提高酶的复用性和稳定性，将酶固定于载体上制备固定化酶。由于磁性纳米粒子具有易于快速分离的特性，将其作为载体用于酶的固定。实验中以溶剂热法制备分散性良好的Fe304纳米粒子，以壳聚糖为改性剂在纳米粒子表面修饰氨基，利用席夫碱反应以戊二醛为交联剂将酶固定于纳米粒子表面，结合毛细管电泳分离效率高的特点，进一步将其应用于中药提取物中酶抑制剂的筛选。实验过程中考察和对比了固定化酶和自由酶的酸碱稳定性和热稳定性，发现酶经固定之后保持了自由酶原有的最适酸碱和温度响应，并且对酸碱和温度环境适应范围更宽；考察和对比了固定化酶和自由酶的储存稳定性和复用性，发现在4℃下储存25天后，固定化酶酶活仅降低了原始酶活的14.5％，而自由酶则降低了原始酶活的55.0%，固定化酶连续使用8次后仍保持了61.3%的原始酶活，而自由酶只能够使用一次，结果表明经固定之后酶的储存稳定性和复用性得到了提高。实验测得酶促反应动力学常数Km为0.85mM，竞争型抑制剂阿卡波糖的抑制常数Ki为7.37μM，半数抑制浓度IC50为13.69μM。最后使用所建立的方法，由18种中药提取物中筛选了α-葡萄糖苷酶抑制剂，结果发现桑叶的抑制效果最好，在浓度为30mg/mL时，检测不到产物峰，说明30mg/mL的桑叶提取物对酶的抑制率达到100%，当将其浓度降低为5mg/mL时，其抑制率依然很高，可以达到83.7%。
作者：刘冬梅 陈娟 师彦平
作者单位：中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室,兰州,730000;中国科学院大学,北京,100039中国科学院兰州化学物理研究所中科院西北特色植物资源化学重点实验室,兰州,730000
母体文献：第21届全国色谱学术报告会论文集
会议名称：第21届全国色谱学术报告会  
会议时间：2017年5月19日
会议地点：成都
主办单位：中国化学会
语种：chi
分类号：TQ0R96
关键词：中药提取物  酶抑制剂  筛选工艺  磁性纳米粒子  固定化α-葡萄糖苷酶
在线出版日期：2019年4月25日
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2024-12-1 19:36 上传 磁固定α葡萄糖苷酶在中药酶抑制剂筛选中的应用.pdf

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