文档摘要：mRNA3'端加polyA是很重要的生物学过程,加ployA需要识别三个信号,分别是UGUA、AAUAAA、UGUGU.以往的结构生物学已经发现了识别UGUA和UGUGU的分子生物学机制,而对于最为保守的AAUAAA的识别机制至今仍旧没有给出很清楚的解释,到目前为止,仅知道WDR33和CPSF30参与该识别过程.在本文中对参与识别的两个蛋白分别进行研究,期望找到识别最保守信号AAUAAA的结构生物学机制.通过克隆并且体外表达了这两个蛋白,借助荧光偏振实验研究了CPSF30和AAUAAA的相互作用,发现CPSF30对AAUAAA的识别是非特异性的,WDR33在大肠杆菌系统无法正确折叠.目前已经利用昆虫表达系统成功表达了蛋白,为后续的功能实验打下了坚实的基础.
Abstract：mRNApolyadenylationisverysignificantduringmRNA3'processing,whichisdeterminedbythreesequenceelements:AAUAAA,UGUA,UGUGU.ConventionalstructuralbiologyuncoveredthedetailedmolecularmechanismaboutrecognitionforUGUAandUGUGU.ButitremainsunclearaboutthemostconservedmotifAAUAAA.Uptonow,weonlyhavetheinformationthatCPSF30andWDR33areinvolvedinrecognizingAAUAAA.Inthepresentwork,weexaminedthoseproteinsindepthindividuallyinordertofindthestructuralmechanismofCPSF30andWDR33recognizingAAUAAA.First,weclonedCPSF30andWDR33invitro,respec-tively.Byfluorescencepolarization,weexaminedtheinteractionbetweenCPSF30andtheconservedmotifAAUAAA.Whatwefoundisthattheinteractionbetweenthemisnonspecific.AsforWDR33,wesuccessfullyex-pressedtheproteinintheinsectsystemsinceitcannotfoldwellinE.coli.system.OurworkprovesthatCPSF30cannotrec-ognizeAAUAAAinvitroalone;perhapsitisWDR33thatrecognizesthesignalmotifAAUAAA.Nowweexpressitsuc-cessfullyinvitrobyinsectsystem,whichprovidedasolidfoundationforourfollowingfunctionalexperiments.
作者：陈旭文Author：ChenXuwen
作者单位：马鞍山师范高等专科学校安徽马鞍山243071
刊名：安徽冶金科技职业学院学报
Journal：JournalofAnhuiVocationalCollegeofMetallurgyandTechnology
年，卷(期)：2024, 34(1)
分类号：
关键词：WDR33 CPSF30 AAUAAA
Keywords：WDR33 CPSF30 AAUAAA
机标分类号：TP309D919.4R741.05
在线出版日期：2024年6月11日
基金项目：AAUAA的分子生物学识别机制探究[
期刊论文] 安徽冶金科技职业学院学报--2024, 34(1)陈旭文mRNA3'端加polyA是很重要的生物学过程,加ployA需要识别三个信号,分别是UGUA、AAUAAA、UGUGU.以往的结构生物学已经发现了识别UGUA和UGUGU的分子生物学机制,而对于最为保守的AAUAAA的识别机制至今仍旧没有给出很清楚的解...参考文献和引证文献
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