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T_GDBK 007-2023 焙烤食品中丙烯醛的快速测定 酶标仪法(荧光探针法)

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1 黄金阳光 发表于 2024-9-29 13:49 | 查看全部 阅读模式
标准编号:T/GDBK007—2023
中文标题:焙烤食品中丙烯醛的快速测定酶标仪法(荧光探针法)
英文标题:Rapiddeterminationofacroleininbakedfood——Microplatereadermethod(fluorescentprobemethod)
国际标准分类号:67.050
中国标准分类号:
国民经济分类:C141焙烤食品制造
发布日期:2023年10月20日
实施日期:2023年10月20日
起草人:中山市食品学会、中山洪力健康食品产业研究院有限公司、咀香园健康食品(中山)有限公司、广东省焙烤食品糖制品产业协会、暨南大学、中山市日威食品有限公司、利诚检测认证集团股份有限公司、中山市强晟水产养殖有限公司、中山海关技术中心、广东省科学院测试分析研究所(中国广州分析测试中心)、华南农业大学、廉江市检验检测中心、广东药科大学、广东省中山市坦洲镇农业服务中心、广州广电计量检测股份有限公司、中山市技师学院、中山市第一职业技术学校、中山市食品药品检验所、中山联测检测技术有限公司、达能(中国)食品饮料有限公司、中山市农产品质量安全检验所、中山市神湾镇大石头盘菠萝专业合作社、中山永恒检测科技有限公司、创味舌尖冻干食品科技(中山)有限公司、中山市火炬高技术产业开发区食品药品监督所、中山火炬职业技术学院、广东省焙烤食品产业技术创新联盟。
起草单位:胡志高、郑萍、林国强、吕品、欧隽滢、罗紫明、钟光波、唐丽、唐光华、唐雪娟、欧仕益、陈伦韬、黄思韵、陈琼华、谭应职、张发妙、黄焯枝、冯鹏、叶文杰、陈丽红、莫康扬、李蓉、陈月玲、吴小勇、朱华兴、叶文杰、李向丽、张延杰、刘金川、董二飞、范雪琳、张瑶、谈欣乐、普昕瑞、吴洁伊、黄乐炫。
范围:本文件规定了焙烤食品中丙烯醛含量测定的荧光法快速测定的原理、试剂和材料、仪器设备、样品制备、试验步骤、试验数据处理、精密度和试验报告等。本文件适用于焙烤食品中丙烯醛的测定,方法检出限为1.12μg/kg,定量限为3.92μg/kg。
主要技术内容:4 原理N-乙酸甲酯-4-巯基-1,8-萘酰亚胺中的巯基对萘酰亚胺荧光母核具有PET效应,其本身荧光十分微弱;而当丙烯醛存在的情况下,N-乙酸甲酯-4-巯基-1,8-萘酰亚胺的巯基与丙烯醛通过迈克尔加成反应形成加合产物,使得PET效应被抑制,加合物在波长380nm发射光激发下产生强荧光,峰值在510nm波长处,其荧光强度在固定条件下与待测样品中丙烯醛浓度成正比,使用带荧光检测器的酶标仪检测,外标法定量。荧光探针法测定丙烯醛的原理见图1。图1荧光探针法测定丙烯醛的原理图5 试剂和材料 5.1 试剂除非另有说明,所有试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。4-溴-1,8-萘二甲酸酐(分析纯)。甘氨酸(分析纯)。三乙胺(分析纯)。乙醇(分析纯)。盐酸(分析纯)。对甲苯磺酸(分析纯)。甲醇(分析纯)。九水合硫化钠(分析纯)。二甲基亚砜(DMSO,分析纯)。柠檬酸(分析纯)。磷酸氢二钠(分析纯)。丙烯醛(分析纯)。5.2 荧光探针的制备将554mg4-溴-1,8-萘二甲酸酐和165mg甘氨酸、252mg三乙胺在80℃的乙醇回流磁力搅拌反应6h,反应完成后冷却至室温,向反应液中加入2.5mL1M盐酸溶液调节pH至白色沉淀析出,经抽滤得到的固体分别用10mL水和乙醇进行洗涤,得到的白色固体即为N-乙酸基-4-溴-1,8-萘酰亚胺;室温下,将167mgN-乙酸基-4-溴-1,8-萘酰亚胺和600mg九水合硫化钠溶解于5mLN,N-二甲基甲酰胺中搅拌反应24h,反应结束后将反应液倒入20mL水中,并用1M盐酸水溶液调节pH至2,有黄色沉淀析出。经抽滤得到的固体用水洗涤五遍后,得到的黄色固体即为N-乙酸基-4-巯基-1,8-萘酰亚胺(Pr-ACR),冷冻干燥,置于-20℃冰箱中备用。5.3 试剂配制柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液pH为2.2,1mmol/L,15.198g一水合柠檬酸和1.955g十二水合磷酸氢二钠溶解于水中,再用250mL容量瓶定容。探针母液:2.15mgPr-ACR溶于0.5mLDMSO中,制成浓度为150mmol/L探针母液,母液要现配现用。探针工作液:移取50μLPr-ACR母液加入到5mL容量瓶中,用4.3.1的缓冲溶液定容到5mL,工作液要现配现用。5.4 标准品丙烯醛标准品(C3H4O,CAS号:107-02-8):纯度大于98.0%。5.5 标准溶液的配置用水配制成丙烯醛浓度为30μmol/L的溶液,再用水稀释混匀得到一系列浓度的标准溶液(0μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、18μmol/L、24μmol/L、30μmol/L)。6 仪器设备6.1 酶标仪(带荧光检测器,Ex250-600nm,Em280-600nm)。6.2 96孔板(黑色)。6.3 粉碎机(细度30-100目)。6.4 天平:感量0.00001g。6.5 移液枪(1μL-10μL、10μL-100μL和100μL-1000μL)。6.6 常规玻璃仪器。6.7 离心机(12000转/分,14000×g)。7 试验步骤7.1 准曲线的绘制移取100μL4.3.3中的探针工作液到96孔板中,再加入50μL4.5中不同浓度的丙烯醛标准液,使丙烯醛浓度分别为0μmol/L、1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、6μmol/L、8μmol/L、10μmol/L,摇匀,并置于25℃下反应90min后,置于酶标仪中进行荧光检测,读取波长510nm处的荧光强度值(激发波长为380nm),其荧光发射光谱图见附录A。7.2 样品的制备将1g磨碎的食品粉末加入到15mL离心管中,加入5mL水,搅拌均匀并超声提取20min,再用离心机在10000r/min的转速下离心20min,收集上清液。离心管中的沉淀物质再用2mL水按上述操作重复提取两次,合并3次提取得到的上清液,定容到10mL,备用。7.3 样品的测定 移取100μL4.3.3中的探针工作液到黑色96孔板中,再加入50μL6.2中的样品提取液,摇匀,置于25℃下反应90min后,用酶标仪进行荧光检测,读取波长510nm处的荧光强度值(激发波长为380nm),每次处理重复3次。7.4 空白实验除不称取样品外,均按照上述测定条件和步骤进行。8 试验数据处理样品中丙烯醛的含量按以下公式计算:……………………………………(1)式中:X——样品中丙烯醛的含量,毫克/千克(mg/kg);56.06——丙烯醛的摩尔质量;C——样品液中丙烯醛的摩尔质量浓度,微摩/升(μmol/L);V——被测样品的总体积,毫升(mL);m——称取样品的质量,克(g)。计算结果以重复性条件下获得的3次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留三位有效数字。9 精密度9.1 一般规定本文件的精密度按照GB/T6379.2的规定确定,重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9.2 重复性在重复性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。9.3 再现性在再现性条件下,获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。10 试验报告试验报告至少应给出以下几个方面的内容:——试验对象;——所使用的标准;——所使用的方法;——结果;——观察到的异常现象;——试验日期。附录A(资料性)荧光发射光谱图

关键词:广东省焙烤食品糖制品产业协会,T/GDBK,焙烤食品制造,丙烯醛,探针,荧光

T_GDBK 007-2023 焙烤食品中丙烯醛的快速测定 酶标仪法(荧光探针法).pdf
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